Микробиологическое исследование штаммов шигелл включало изучение
антигенной структуры микроколоний, выросших на чашках с первичными
(диагностическими) посевами для установления сероварианта
возбудителя. Определение уровня специфических антител к шигеллам
Флекснера и Зонне в сыворотке крови проводили в реакции непрямой
гемагглютинации (РНГА) с использованием стандартного отечественного
антигенного эритроцитарного шигеллезного диагностикума Флекснера
1-5, Флекснера 6 и Зонне (производство РАО «Биопрепарат»,
предприятие по производству бактерийных препаратов НИИ вакцин и
сывороток, Санкт-Петербург).
У больных с диагнозом клиническая дизентерия для оценки степени
эндогенной интоксикации в плазме крови и эритроцитах определяли
уровень веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ) по
методу М.Я. Малаховой (1995), соотношение уровня этих показателей;
вычисляли лейкоцитарный индекс интоксикации. Для определения уровня
ВНСММ проводилось предварительное осаждение крупномолекулярных
веществ плазмы крови и эритроцитов раствором ТХУ и регистрация
спектральной характеристики водного раствора супернатанта при
различных длинах волн на спектрофотометре. Обследование проводилось
в первые сутки поступления, на 3-5-й день болезни и в период ранней
реконвалесценции (7-10-й день) Оценка интенсивности процессов
свободнорадикального окисления в плазме крови и эритроцитах
обследованных больных проводилась методом активированной
хемилюминесценции с использованием стандартных растворов и
реактивов. В качестве активатора использовалась 30%-ная
гидроперекись водорода. Оценивались пики максимальной и
минимальной хемилюминесценции, интенсивность свечения на 30, 60,
90 и 120-й секундах исследования (биохимическая лаборатория
НИИДИ).
Кроме этого, больным дизентерией проводилось лабораторное
обследование, включавшее клинические анализы крови, мочи,
копроцитограмму, биохимическое исследование крови с определением
уровня элекролитов, мочевины, креа-тинина стандартными
методами.
Определение противоиерсиниозных антител (AT) проводили
двукратно в стандартной серологической реакции агглютинации (РА),
используя иерсиниозные корпускулярные антигены Y. enterocolitica
ОЗ, Y. enterocolitica ОЗ, Y. pseudotuberculosis производства
«Предприятия по производству бактерийных препаратов НИИЭМ им.
Пастера» (Санкт-Петербург). Средний геометрический титр антител
выражали в обратных логарифмах (1/lg).
Для изучения специфических IgA, IgM и IgG в сыворотке крови и
копрофильтратах (секреторная фракция IgA) применялась реакция
непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ) с использованием
моноспецифических сывороток против иммуноглобулинов человека (НИИ
эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи, Москва),
модификация метода Д.С. Быценко (2000).
Определение фагоцитарной активности лейкоцитов крови проводили
методом В.М. Бермана и Е.М. Славской (1958). Поглотительную
способность нейтрофилов оценивали по фагоцитарной активности и
фагоцитарному числу. Окислительные процессы в лейкоцитах изучали с
помощью теста восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест)
(Нагоев Б.С, 1983) (бактериологическая лаборатория НИИДИ).
Концентрацию иммуноглобулинов (Ig) A, M, G классов определяли
стандартным методом радиальной иммунодиффу-зии по Mancini (1965) с
использованием моноспецифических антисывороток предприятия по
производству бактерийных препаратов Нижегородского НИИЭМ.
Содержание общего IgE определяли методом твердофазного
иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием коммерческих
тест-системТОО «Полигност» (Санкт-Петербург). Определение общего
пула ЦИК проводили методом преципитации полиэтиленгликолем по
Digeon (1977) в планшетной модификации (иммунологическая
лаборатория НИИДИ).
Определение уровня цитокинов в сыворотке крови (TNF-α, IFN-γ,
IL-4, IL-6) и в надосадочной жидкости (IL-2) проводили методом
твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) в соответствии с
инструкциями, прилагаемыми к наборам производства ТОО «Протеиновый
контур» (НИИ ОЧБ, Санкт-Петербург) (иммунологическая лаборатория
НИИДИ). Для ориентировочной оценки соотношения Thl/Th2 мы
использовали коэффициент IFN-γ/IL-4 (Mosmann Т., Sad S.,
1996).
Пролиферативную активность Т-лимфоцитов оценивали в реакции
бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) на фитогемагглютинин (ФГА)
фирмы «Difco» (США) в конечной концентрации 10 мкг/мл в культурах
цельной крови с морфологическим учетом результатов (Новиков Д.К.,
1996). Супрессию пролиферативного ответа устанавливали по числу
бластных форм менее 65% – наименьшее значение показателя у
здоровых детей. Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической
крови проводили с помощью панели моноклональных антител серии ИКО
производства НПЦ «Медбиоспектр» (Москва) в лимфоцитотоксическом
тесте (Кетлинский С.А., Калинина Н.М., 1998). Для оценки соотношения
«позитивной» и «негативной» (Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н.,1998)
активации лимфоцитов мы ввели коэффициент CD25/CD95
(иммунологическая лаборатория НИИДИ).
Обследование больных бактериальной дизентерией и иерсининозной
инфекцией включало ежедневную клиническую оценку симптомов
интоксикации и лабораторный мониторинг.
Таблица 1. Иммунологические показатели
здоровых лиц (n=10)
Фенотипический состав лимфоцитов, пролиферативная
активность Т-лимфоцитов
|
Показатель
|
Цитокины,
факторы гуморального ответа
|
Показатель
|
ФГА-РБТЛ
|
75,0±2,0%
|
TNF-α,
|
124±33 пг/мл
|
CD8
|
21,2±1,8%
|
IFN-γ
|
92±24 пг/мл,
|
CD20
|
23,5±2,5%
|
IL-4
|
67±28 пг/мл
|
CD25
|
18,8±1,8%
|
IgE
|
100±32 кЕ/л
|
CD95
|
22,2±1,6%
|
ЦИК
|
0,115±0,10 ед. опт. пл.
|
CD25/CD95
|
0,85±0,07
|
|
|
Препарат Реамберин 1,5% для инфузий назначали больным в остром
периоде бактериальной дизентерии в первые 2-3 дня госпитализации.
Доза введения зависела от возраста ребенка и составляла в среднем
200-400 мл (10 мл/кг), скорость инфузий 8-10 капель в минуту.
Циклоферон назначали в острый период бактериальной дизентерии,
псевдотуберкулеза или кишечного иерсиниоза, а также в случаях
длительного бактериовыделения или в случае рецидива заболевания по
представленной схеме.
1-й день – 2-й день – 4-й день – 6-й день – 8-й день в
возрастной дозе:
до 3-х лет – 150 мг;
4-7 лет – 300 мг;
8-12 лет – 450 мг;
старше 12 лет – 600 мг 1 раз в день за 30 мин. до
еды не разжевывая.